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      市面上常見的玻璃底培養皿，通常是在塑料培養皿底部打個洞，再將厚度為170-220μm的蓋玻片或細胞爬片用無影膠水或硅膠粘于培養皿設備底部。并不是整個培養皿的底部都是玻璃材質的。適用于觀測的區域僅僅在打孔的區域。但是由于玻璃的疏水性，往往在培養細胞的時候，細胞不能在玻璃上很好地貼壁，生長狀態并不好，甚至在做共聚焦掃描成像的時候發生細胞脫片的現象。

      想要細胞好好貼壁，所使用的玻璃底培養皿進行細胞培養之前，要確認已經包被了特定的蛋白試劑。

      培養不同的細胞，需要的包被試劑也不同。同時，因為用于包被的蛋白是生物產物，所以不同公司的包被蛋白的產品純度和用量都是不同的，本技術帖只是提供參考，具體的包被試劑用量還是要參考所用品牌的說明書。并且最好以自己所用的試劑先做一個梯度實驗，找出最適合的包被濃度。

      PLL包被適用于絕大多數細胞，尤其適用于中樞系統神經元的培養。在使用時需要使單位面積上的蛋白含量（μg/cm2）達到理想的量。本例中PLL推薦包被的用量為 2μg/cm2。需要根據包被面積，包被體積，來計算所需要蛋白質的量。

      比如：35mm玻璃底培養皿，細胞生長面積是3.5cm2，包被面積是4.1cm2，包被液體積是400μl，那根據推薦用量2μg/cm2。那么單孔中需要8.2μg的PLL，如果只加入400μl的PLL溶液，那PLL的溶液濃度為20.5μg/ml（約為 20μg/ml）。所以，需要用超純水將原液進行稀釋。

      具體步驟：

      1.使用超純水按照1:5稀釋PLL原液。

      2.在每個35mm玻璃底培養皿中加入400μl的PLL稀釋液。

      3.室溫孵育1-2小時，吸出PLL稀釋液。

      4.使用2ml PBS溶液或無血清培養基小心的清洗3次，吸盡清洗液。

      5.直接加入細胞懸液進行培養。

      方法評價：由于各種包被蛋白的性質不同，不同的包被蛋白使用方法也不一樣。經常由于需要對玻璃底培養皿包被，而產生了新的污染。而且污染往往是開始養細胞了以后才會發現，這樣不僅耽誤了時間，而且也浪費了試劑盒耗材。畢竟包被蛋白試劑和質量有保證的玻璃底培養皿價格也是不菲的（質量不過關的玻璃底培養皿有可能會因為膠水沒有粘勻而漏液或者使用的膠水對細胞有毒性）。